人妻少妇精品专区性色av,国产亚洲日韩一区二区三区,久久久久久亚洲精品无码,久久强奷乱码老熟女网站

產(chǎn)品列表 / products

首頁 > 技術(shù)文章 > 分離豬胚胎多能干細胞方法

分離豬胚胎多能干細胞方法

點擊次數(shù):1363 更新時間:2019-04-09

胚胎干細胞從囊胚內(nèi)細胞團分離得到,具有自我更新和分化為3個胚層和生殖細胞的潛能。豬胚胎分離培養(yǎng)體系會改變細胞核移植胚胎、孤雌胚胎和體內(nèi)胚胎多能基因的表達,也會影響豬多能干細胞形成的效率和質(zhì)量。自增壓液氮罐

細胞培養(yǎng):用于核移植供體的豬胎兒成纖維細胞從初生豬仔的耳部分離得到。細胞培養(yǎng)基為DMEM,15%胎牛血清,培養(yǎng)溫度為37℃。使用0.25%(W/V)的胰蛋白酶消化,中和后離心200×g。將細胞重懸后并加入等量凍存液(40%DMEM,40%FBS和20%DMSO),貯存在液氮中。

卵母細胞的收集和準備:從屠宰場收集豬卵巢,保存在含有青/鏈霉素的生理鹽水中,運輸溫度32~38℃,3h內(nèi)運回實驗室。采用抽吸法采集卵巢卵母細胞。抽取3~6mm卵泡中的卵母細胞置于15mL離心管中,37℃水浴靜置數(shù)分鐘,待卵母細胞沉降后,用洗卵液洗2遍,顯微鏡下挑取顆粒細胞層達3層以上的卵丘卵母細胞復(fù)合物,然后將COCs轉(zhuǎn)入U型皿中培養(yǎng)42~44h,每孔加500μL成熟培養(yǎng)液,每孔放置50~70枚。

孤雌激活和胚胎培養(yǎng):用電融合儀將成熟的卵母細胞進行電激活,將卵母細胞移至2mmol/L6D孵育2.5h。分別將卵母細胞轉(zhuǎn)移到胚胎培養(yǎng)基G1、NCSU23和豬受精卵培養(yǎng)基,24h后記錄卵裂率。3d后,將培養(yǎng)基G1中發(fā)育的胚胎移入囊胚培養(yǎng)基G2。再次培養(yǎng)3~4d后,統(tǒng)計囊胚個數(shù)并收集。

體細胞核移植胚胎培養(yǎng):去除成熟卵母細胞極體,隨后注入供體細胞。顯微操作后,移入含10%FBS的M199培養(yǎng)基,在38.5℃,5%CO2條件下孵育0.5h,使用電融合儀進行激活處理,移入6D孵育2.5h后,將重組胚胎在NCSU23培養(yǎng)基中培養(yǎng)3d,隨后替換NC-SU23繼續(xù)培養(yǎng)3~5d,觀察胚胎的發(fā)育。

體內(nèi)胚胎的收集:從人工受精的母豬體內(nèi)收集第7~8d的囊胚,所有方法參照Stokes等。每天監(jiān)測母豬的發(fā),將發(fā)日期作為0d,鑒定后的6、12和18h進行人工受精。從子宮沖洗胚胎時使用預(yù)熱的含10%FBS的磷酸緩沖鹽溶液。

從豬胚胎分離胚胎多能干細胞:將去除透明帶的囊胚接種到絲裂 素C處理過的小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層上2~4d,囊胚內(nèi)細胞團在3~5d后出現(xiàn)。待ICM大小適中時,用機械法分離細胞,重鋪到新的飼養(yǎng)層上,并使用不同的豬胚胎干細胞培養(yǎng)基,胚胎多能干細胞克隆每5~7d使用機械法傳代。自增壓液氮罐

15611258074
在線咨詢
色婷婷国产精品视频一区二区| 两个人免费视频| 人妻少妇偷人精品无码洋洋av| 人妻斩り56歳无码| 精品国产av 无码一区二区三区| 老同学3免费完整版在线观看| 99久久国产宗和精品1上映| 久久精品国产精品亚洲| 精品白嫩BBWBBWBBW| 大战熟女丰满人妻av| 免费的国产MMORPG| 国产精品久久久久精品三级卜| 国产欧美日韩一区二区加勒比| 人妻少妇69式99偷拍| 欧美变态另类刺激| 韩国漫画漫免费观看免费| 污污污WWW精品国产网站| 精品亚洲av在线无码播放| 糖心VLOG精品一区二区| 欧美大成色WWW永久网站婷| 精品香蕉一区二区三区| 久久久久国產麻豆无碼AV| 狂野欧美性猛交XXXX| 草草久久久亚洲av成人片| 国产精品美女一区二区三区| 无码高潮少妇毛多水多水免费| 国产成人无码精品久久二区三区| 亚洲日韩欧洲乱码av夜夜摸| 国产丰满老熟女重口对白| 国产成年无码久久久久毛片| 国产高清不卡一区二区| 一个人看的www免费视频| 边摸边吃奶边做爽免费视频99| 无码精品视频一区二区三区| 亚洲国产精品无码久久A片小说| free欧美性xxxxhd| 久久精品久久久久观看99水蜜桃 | 日韩蜜桃一区二区三区| 韩国a片巜上司与的人妻| 欧美日韩精品视频一区二区| 亚洲A片无码一区二区蜜桃久久|